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使用BD流式細(xì)胞儀分析的主要目的在于區(qū)分細(xì)胞對(duì)于檢測(cè)指標(biāo)是陽(yáng)性還是陰性,或計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞與陰性細(xì)胞的比例。這就需要準(zhǔn)確的儀器設(shè)置及良好的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性,分析時(shí)運(yùn)用恰當(dāng)對(duì)照及分析方法。各種不同的流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)需要不同的陰性對(duì)照,因而也是一些爭(zhēng)論及討論的焦點(diǎn)。
在BD流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)中為基礎(chǔ)的問(wèn)題是哪些染色的細(xì)胞是陽(yáng)性或陰性,或?qū)τ谀骋粯?biāo)志物陽(yáng)性細(xì)胞或陰性細(xì)胞的比例是多少。要回答這個(gè)問(wèn)題需要仔細(xì)調(diào)節(jié)儀器并使用對(duì)照品。
首先,探測(cè)器的增益需調(diào)節(jié)準(zhǔn)確從而獲得佳的靈敏度,熒光補(bǔ)償必須設(shè)置正確,從而避免出現(xiàn)虛假或不必要的錯(cuò)誤結(jié)果。
第二,對(duì)于沒(méi)有明顯雙峰分布(陽(yáng)性峰)的樣本,需要做設(shè)門(mén)對(duì)照。在某些情況下,生物比較樣本(如未刺激的細(xì)胞)可提供佳的設(shè)門(mén)對(duì)照來(lái)決定細(xì)胞陽(yáng)性范圍。在某些不可能獲得生物比較樣本的情況下,可使用同型對(duì)照或FMO對(duì)照。以上這些并不是所有的選擇,選擇何種方式取決于是熒光滲漏或抗體非特異性結(jié)合對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響大小。初,可通過(guò)檢測(cè)多種對(duì)照來(lái)決定哪一個(gè)更適合于定義陽(yáng)性、陰性界線。在任何實(shí)驗(yàn)中都須避免因?yàn)闆](méi)有充分考慮而使用不恰當(dāng)?shù)膶?duì)照品。堅(jiān)持使用經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明的設(shè)門(mén)方法將有助于標(biāo)準(zhǔn)化BD流式細(xì)胞儀分析項(xiàng)目來(lái)解答重要的臨床問(wèn)題。
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