BD流式細胞儀又稱熒光激活的細胞分選器,作為進行流式細胞分析的儀器,它集電子技術、計算機技術、激光技術、流體力學、圖像技術、細胞生物學、免疫學理論于一體,是一種非常先進的檢測儀器,被譽為生物醫(yī)學實驗室的“CT”。流式細胞術已經(jīng)成為一種用途廣泛和先進的細胞分析技術,在細胞生物學、血液學、腫瘤學、免疫學等基礎和臨床醫(yī)學領域發(fā)揮著重要作用。
細胞周期是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經(jīng)歷的全過程,細胞的遺傳物質復制并均等地分配給兩個子細胞。細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細胞在分裂結束后暫時離開細胞周期,停止細胞分裂,執(zhí)行一定生物學功能(G0期)。
由于細胞周期各時相的DNA含量不同,通常正常細胞的G1/G0期具有二倍體細胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍體細胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結合,其熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量。因此,通過
BD流式細胞儀PI染色法對細胞內(nèi)DNA含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區(qū)分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細胞百分率。
PI即碘化丙錠,可以與細胞內(nèi)DNA和RNA結合。PI不能通過細胞膜完整的細胞(如活細胞和早期凋亡細胞),在標本制備時,必須先用乙醇或其他破膜劑增強細胞膜的通透性,才能使PI進入細胞內(nèi)與細胞內(nèi)的核酸結合。乙醇通常為終濃度為70%的冷乙醇。
如果應用于
BD流式細胞儀,采用RNA抑制劑將RNA消化后,通過流式細胞術檢測到的與DNA結合的PI的熒光強度直接反映了細胞內(nèi)DNA含量的多少。當然,PI也可用于作細胞核染色,作為觀察或定量細胞的方法。