定量PCR儀主要由兩部分組成,一個是PCR系統(tǒng),一個是熒光檢測系統(tǒng)。市面上不同品牌和設(shè)計的定量PCR儀也不斷推陳出新,這里著重介紹3類不同的定量PCR儀。
1.傳統(tǒng)孔板式定量PCR儀
傳統(tǒng)孔板式定量PCR儀的優(yōu)點是可容納的樣本量大而且無需特殊耗材,可以采用傳統(tǒng)的96孔板甚至384孔板進(jìn)行批量的定量反應(yīng),但是缺點也顯而易見-溫度均一性不佳—平板固定加熱模塊的PCR溫度控制有邊緣效應(yīng)—樣品槽上每個孔之間的溫度存在差異—也就是所謂位置效應(yīng),因此標(biāo)準(zhǔn)曲線的反應(yīng)條件應(yīng)難以做到與樣本*一致,樣本和樣本之間的溫度控制也可能存在差異,對于靈敏度*的定量PCR來說,任何極微小的差異都會以指數(shù)級別的規(guī)模被放大,不能不說是一種缺憾。傳統(tǒng)反應(yīng)板面積大,溫度控制的性、升降溫速度也相對較慢,因而反應(yīng)速度也較慢。
2.離心式定量PCR儀
為了克服平板式定量pcr溫度均一性差的缺點,聰明的研究人員又開發(fā)出創(chuàng)新概念的離心式實時定量pcr儀,pcr擴(kuò)增樣品槽被巧妙地設(shè)計為離心轉(zhuǎn)子的模樣,借助空氣加熱和轉(zhuǎn)子在腔內(nèi)旋轉(zhuǎn),轉(zhuǎn)子上每個孔都是“等位”的,幾乎無差別,很好的解決了每個樣品孔之間的溫度均一性的關(guān)鍵問題。樣品間溫度差異小于±0.01℃,大程度地保障了標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品之間條件的一致性。利用空氣做加熱介質(zhì)的優(yōu)點在于能實現(xiàn)與反應(yīng)體系無縫接觸,接觸面積大且加熱均勻。
3.熒光定量PCR儀
對于國內(nèi)的用戶來說比較新鮮,機(jī)型小巧,只有16個樣品槽,它的獨到之處在于這16個樣品槽分別擁有獨立的智能升降溫模塊,也就是說這16個樣品槽相當(dāng)于16臺獨立的定量pcr儀!獨立控溫的好處首先是,你可以在同一定量pcr儀上分別進(jìn)行不同條件的定量pcr反應(yīng),更為靈活自定義的梯度優(yōu)化反應(yīng)也好,或者是*不同的幾組反應(yīng)。對于實驗室,熒光定量pcr儀使用頻率可以被大化,實驗人員都不用等待!允許不同條件pcr同時進(jìn)行的定量pcr儀擁有*的優(yōu)點,是其它任何平板式或者離心式定量pcr都不具備的。