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產生pcr儀擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺的原因有以下幾種:
1、反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系,這是常見的原因;
2、與反應起始時RNA的總量及純度有關:建議在試驗中加入對照RNA;
3、*鏈的反應產物在進行PCR擴增時,在總的反應體系中的含量不要超過1/10:建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物(GSP)用于*鏈合成。
4、由于RNA模板存在二級結構,如環(huán)狀結果,有可能導致GSP無法與模板退火;或SSⅡ反轉錄酶無法從此引物進行有效延伸。
5、目的mRNA中含有強的轉錄中止位點,可以試用以下方法解決:
①將*鏈的反應溫度提高至50℃。
②使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進行*鏈反應。
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