定量PCR儀的循環(huán)參數(shù)修改方法刪除:按住Shift鍵并在相應(yīng)的Stage或Step中點擊,使該步驟被選中變黑,再按Del鍵即可刪除。
插入:在需要插入?yún)?shù)的位置點擊,出現(xiàn)粗黑豎線后,分別點擊Add Hold、Add Cycle或Add Step按鈕添加保溫、循環(huán)或循環(huán)中的一個步驟。
修改溫度和時間:拖動鼠標(biāo),選中需要修改的溫度或時間數(shù)字,輸入新的數(shù)值即可。
其他設(shè)置反應(yīng)體積:定量PCR儀的標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體積是50µL;如果想修改的話,建議大于25µL。
融解曲線試驗:在Dissociation Protocol選項左邊的方框中打鉤,儀器即在定量PCR儀循環(huán)完成后繼續(xù)做融解曲線試驗。
啟動擴增點Save按鈕保存文件設(shè)置。確認(rèn)96孔板或全部樣品管在主機內(nèi)放置妥當(dāng)后,點擊Start按鈕,開始PCR循環(huán)。屏幕上動態(tài)顯示PCR進程和剩余時間。
監(jiān)控進程切換到Results頁面的Amp Plot子頁面,可以實時顯示PCR曲線隨著循環(huán)增加而逐步增長的實際情況。如果Detector選FAM或VIC,只顯示對應(yīng)探針的變化情況;如果選All,則同時顯示所有探針的反應(yīng)進程。
保存結(jié)果程序結(jié)束后,點Disconnect按鈕,然后File→Save保存實驗結(jié)果。可以保存為.sds格式,也可以保存為.sdt格式,作為以后同類實驗的模板,節(jié)省軟件設(shè)置時間。